Если коротко
- Гелевая карта — пластиковая пластина с микроколонками, заполненными гелем и реагентами.
- Агглютинаты задерживаются гелем вверху колонки, свободные эритроциты при центрифугировании уходят на дно.
- Центрифуга для гелевых карт — с ротором под карты и программами под реагенты; режим задаёт производитель карт.
- Для непрямого антиглобулинового теста нужна инкубация при 37 °C — для этого инкубатор ЦФ-ГК001 на 24 карты.
- В линейке KADAMM пять центрифуг: на 12 или 24 карты, до 2250 ×g.
Как работает метод гелевых карт
Гелевая карта — это пластиковая пластина с несколькими микроколонками. В каждой колонке гель, в который введены антитела нужной специфичности или антиглобулиновая сыворотка. В реакционную камеру над гелем вносят взвесь эритроцитов пациента (и, при необходимости, сыворотку), затем карту центрифугируют.
Если эритроциты склеились в агглютинаты, гель их не пропускает: они остаются вверху или в толще колонки. Если реакции нет, отдельные эритроциты проходят через гель и собираются плотной кнопкой на дне. Интенсивность реакции оценивают по положению эритроцитов в колонке — от отрицательного результата (всё на дне) до максимального (полоса на поверхности геля).
Инкубация нужна не для всех тестов: определение группы и резус-фактора обычно идёт без неё.
Какие исследования делают на картах
- определение групп крови по системе AB0 и резус-фактора;
- фенотипирование эритроцитов по другим антигенам;
- прямой и непрямой антиглобулиновый тест (проба Кумбса);
- скрининг и идентификация антиэритроцитарных антител;
- пробы на индивидуальную совместимость перед переливанием.
Почему нужна специальная центрифуга
Колонки гелевой карты ориентированы вдоль её длинной стороны, и эритроциты должны двигаться строго по оси колонки. Поэтому карты центрифугируют в качающемся (свинг) роторе: при вращении держатели выходят в горизонталь, и колонка смотрит точно по направлению ускорения. В угловом роторе эритроциты прижмёт к стенке, и результат будет нечитаемым.
Второе требование — точный профиль центрифугирования. Режим (обороты, время, иногда ступени) задаёт производитель карт, и у разных реагентов он разный. Поэтому центрифуги для гелевых карт хранят отдельные программы под реагенты, а у ЦФ-ГК402 и ЦФ-ГК403 профиль можно сделать ступенчатым.
dИнкубатор 37 °C
Непрямой антиглобулиновый тест и часть проб на совместимость требуют инкубации карт перед центрифугированием. Водяная баня для пластиковых карт неудобна, поэтому используют сухой термоблок. KADAMM ЦФ-ГК001 держит 37 °C с точностью лучше 0.5 °C и вмещает 24 карты в двух отсеках по 12 — у каждого отсека свой таймер.
Как выбрать центрифугу для гелевых карт
12 или 24 карты за цикл
Ёмкость ротора выбирают по потоку проб в пиковые часы. Двенадцать карт — небольшая лаборатория или отделение переливания крови стационара с умеренной нагрузкой. Двадцать четыре — станция переливания, крупная КДЛ, лаборатория, где карты обрабатывают сериями.
Нужны ли дополнительные роторы
Если в лаборатории одна центрифуга на всё иммуногематологическое звено, смотрите на модели с дополнительными роторами. У ЦФ-ГК402 есть роторы для отмывки клеток в серологических исследованиях и HLA-типировании, у ЦФ-ГК403 — угловые роторы 12×5 и 30×5 мл под вакутейнеры, у ЦФ-ГК404 — угловые роторы и ротор для капилляров.
| Модель | Скорость / ОЦУ | Ёмкость | Что отличает |
|---|---|---|---|
| ЦФ-ГК301 | 3000 об/мин / 1192 ×g | 24 карты | программы под реагенты, 10 ступеней разгона |
| ЦФ-ГК401 | 4000 об/мин / 1480 ×g | 12 карт | компактная, программы под реагенты |
| ЦФ-ГК402 | 4000 об/мин / 2250 ×g | 12 или 24 карты | ступенчатый профиль, роторы для отмывки клеток |
| ЦФ-ГК403 | 4000 об/мин / 2250 ×g | 12 или 24 карты | угловые роторы 12×5 и 30×5 мл, отмывка эритроцитов |
| ЦФ-ГК404 | 4000 об/мин / 2039 ×g | 24 карты | угловые роторы и ротор для капилляров |
| ЦФ-ГК001 | инкубатор 37 °C | 24 карты (2×12) | сухой термоблок, два независимых таймера |
| Скорость | 3000 об/мин |
| ОЦУ | 1192 × g |
| Карт | 24 |
| Скорость | 4000 об/мин |
| ОЦУ | 2250 × g |
| Карт | 12 или 24 |
| Скорость | 4000 об/мин |
| ОЦУ | 2250 × g |
| Карт | 24 |
| Температура | 37 °C |
| Точность | <0.5 °C |
| Карт | 24 |
Как читать результат
После центрифугирования карту осматривают на светлом фоне. Отрицательная реакция — все эритроциты собраны плотной кнопкой на дне колонки. Положительная — эритроциты задержаны гелем: при сильной реакции они образуют полосу на поверхности геля, при слабой распределены в толще колонки. Промежуточные варианты оценивают по шкале интенсивности, принятой в инструкции к картам.
Сомнительные картины
Двойная популяция — часть эритроцитов вверху, часть на дне — бывает, например, после переливания крови и требует интерпретации врачом. Гемолиз, сгустки в пробе и пузырьки воздуха в колонке дают ложные картины, поэтому пробу проверяют до внесения в карту, а карты перед работой осматривают на целостность геля и отсутствие высыхания. Если картина нечитаема, исследование повторяют на новой карте.
Типичные ошибки
- Неподходящий ротор — карты стоят не по оси ускорения, эритроциты оседают на стенке колонки.
- Режим «на глаз» — программа не соответствует инструкции к картам, слабые реакции теряются.
- Пропущена инкубация — непрямой антиглобулиновый тест без 37 °C даёт ложноотрицательный результат.
- Задержка перед чтением — после остановки карты оставляют надолго, и картина в колонке меняется.
- Несбалансированный ротор — неполную загрузку дополняют балансировочными картами.
Как организовать рабочее место
- Центрифуга и инкубатор стоят рядом: после инкубации карты сразу переносят в ротор.
- Программы заводят по инструкциям к используемым картам и подписывают по названию реагента.
- Пустые гнёзда ротора заполняют балансировочными картами — иначе дисбаланс.
- Результат читают сразу после остановки ротора и фиксируют фото или в журнале.